Setelah sel kelihatan terpisah tambahkan 2 jilid media pertumbuhan lengkap pra-panas untuk menyahaktifkan trypsin. Sebarkan medium secara perlahan-lahan dengan pippet pada permukaan lapisan sel beberapa kali untuk memastikan pemulihan >95% sel.
Bagaimanakah cara saya menghentikan aktiviti trypsin?
Pencernaan tripsin boleh dihentikan dengan pembekuan atau dengan menurunkan pH tindak balas di bawah pH 4 dengan menambahkan asid formik, asetik atau trifluoroasettik (trypsin akan kembali aktif apabila pH dinaikkan melebihi pH 4). Sampel yang dicerna boleh disimpan pada -20°C.
Apakah yang meneutralkan trypsin?
Penimbal mengandungi ion kalsium dan magnesium juga akan melambatkan aktiviti tripsin. FBS bagaimanapun adalah cara yang lebih berkesan untuk menghalang aktiviti trypsin.
Adakah serum menyahaktifkan trypsin?
Serum menyahaktifkan baki tripsin yang tinggal daripada pencernaan enzimatik buah pinggang dan enzim proteolitik yang kemudiannya disintesis oleh sel. Sel-sel baru trypsinized boleh tumbuh menjadi monolayers tanpa kehadiran serum dengan syarat ia berulang kali dibasuh untuk mengeluarkan sisa tripsin.
Berapa banyak media yang diperlukan untuk menyahaktifkan trypsin?
Selagi anda menggunakan sekurang-kurangnya nisbah 1:1 5-10% serum-mengandungi medium dengan trypsin anda perlu ada perencatan yang lebih daripada mencukupi, diikuti dengan sentrifugasi dan tukar sederhana dengan medium segar.
