Pertama sekali, kedua-dua EcoR1 dan Xba1 meninggalkan 5' tidak terjual apabila mereka mencerna DNA (begitu juga Nde1). Dalam kedua-dua kes hujung 3' ceruk itulah sebabnya poliermas boleh menambah tapak. Kedua, semua polimerase hanya boleh menambah tapak pada hujung 3', jadi Klenow akan menambah 4 tapak pada hujung 3' surut kedua-dua tapak untuk menghasilkan hujung tumpul.
Adakah enzim sekatan meninggalkan 5 fosfat?
Vektor dan sisipan yang dicerna oleh enzim sekatan mengandungi pengubahsuaian terminal yang diperlukan (5' fosfat dan 3' hidroksil), manakala serpihan yang dihasilkan oleh Polymerase Chain Reaction (PCR) mungkin tidak.
Bolehkah hujung tumpul diikat?
Pengikatan hujung tumpul
Pengikatan hujung tumpul tidak melibatkan gandingan asas hujung yang menonjol, jadi sebarang hujung tumpul boleh diikat ke hujung tumpul yang lain. Hujung tumpul mungkin dihasilkan oleh enzim sekatan seperti SmaI dan EcoRV.
Adakah Taq polymerase menghasilkan hujung tumpul?
Ya… Taq Polymerase menambah A-Overhangs jika anda mengekalkan langkah sambungan terakhir pada 72 dC pada PCR. Selalunya digunakan untuk Pengklonan TA.
Mengapa menggunakan serpihan Klenow dalam penjujukan DNA?
Serpihan Klenow amat berguna untuk tugas berasaskan penyelidikan seperti: Sintesis DNA untai dua daripada templat untai tunggal . Mengisi 3' hujung serpihan DNA yang surut untuk menjadikan 5' terjuntai tumpul . Mencerna jauh menonjol 3' overhang.
