Artifak dimer primer biasanya berlaku pada nombor kitaran ambang yang besar (biasanya > 35 kitaran), yang lebih tinggi daripada nombor kitaran ambang untuk amplikon yang dikehendaki. Dimer primer meningkat dengan ketara apabila DNA genomik heterolog ditambahkan.
Di manakah anda akan melihat dimer primer pada gel DNA?
Dalam PCR titik akhir bukan kuantitatif, dimer primer akan kelihatan sebagai sapuan yang lebih kurang samar pada gel agarose, di bawah jalur produk yang menarik.
Bagaimanakah dimer primer terbentuk?
Dimer primer terbentuk apabila dua primer terikat antara satu sama lain, bukannya pada DNA templat, disebabkan kawasan pelengkap primer.
Bagaimanakah anda mengesan dimer primer?
Cara paling mudah untuk menyemak primer-dimer ialah untuk membandingkan tindak balas anda terhadap kawalan negatif anda (air dan bukannya DNA atau RNA). Dimer primer masih akan terbentuk dalam kawalan negatif. Sesetengah set primer lebih berkemungkinan membentuk dimer daripada yang lain.
Mengapa dimer primer muncul?
Kebanyakan dimer primer dilihat disebabkan kepekatan primer yang tinggi dalam campuran tindak balas PCR. Atau jika tiada amplifikasi PCR dan anda boleh lihat pada dimer primer dalam gel agarose. Jika dapat melihat produk PCR maka anda boleh mengurangkan kepekatan perdana dan mengekalkan keadaan lain yang sama.
